正就读中学的少年迈尔斯(沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音)意外被一只遭受放射性污染的蜘蛛咬伤,随后身体发生奇特的变化。偶然机缘,他目睹了蜘蛛侠(克里斯·派恩 Chris Pine 配音)和犯罪头目金并(列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音)的战斗。为了阻止金并利用时空对撞机扰乱宇宙,蜘蛛侠最终壮烈牺牲。可未过多久,来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克(杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音)出现在迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋,并帮助这个帕克返回自己的宇宙,他们闯入金并的老巢。在这一过程中,二人遭到章鱼博士和徘徊者的狙击。与此同时,来自其他宇宙的女蜘蛛侠、暗影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们合力与恶势力展开斗争……
詹姆斯·麦卡沃伊,凯瑟琳·麦克马克,朱利安·格洛弗,德里克·雅各比,伊恩·哈特,克莱尔·斯金纳,大卫·哈雷伍德,萨曼莎·邦德,Marina Bouras,珀尼勒·赫马克,保罗·赫特尔,乔纳斯·卡尔森,梅琳达·金纳曼,Jesper Langberg,赫宁·莫里岑,索伦·斯贝宁,Jens Jacob Tychsen
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